1. 小鼠 tail DNA要如何抽 ?
市面上有許多抽tail的kit。Core 目前所使用的Kit 為Promega Wizard Genomic-DNA Purification Kit。
請在修飾過的區域設計一組primer，可區分WT與Targeted 的DNA片段，大小約 300-500 bp，再以PCR的方式進行check。
待仔鼠出生約1個月可離乳，core連絡人員會與user連絡告知狀況並約定時間移交。
4. 移交chimera mice 是否需要自行帶cage ?
請自行準備含墊料乾淨滅菌的cage
5. Implantation結束後何時可以得到chimera ?
從Implantation結束後17天，即可得到chimera，再待28天仔鼠離乳。
6. 小鼠懷孕天數?
平均懷孕期為19-21天
在出生後3-4週(約28天)才可離乳。
8. 小鼠幾週性成熟？
出生6~8週後小鼠性成熟，建議 chimera 公鼠在7週時可開始配種。
9. 小鼠如何分辨公母？
公鼠：生殖器離肛門口的距離較母鼠遠，較大週數的公鼠可以看到睪丸。
母鼠：生殖器離肛門口的距離較公鼠近，可以看到腹部有4對乳頭。
10. 小鼠一直被吃掉該怎麼辦 ?
飼養環境需保持安寧，避免震動及噪音，母鼠懷孕後期放置巢料和飼料在籠內，出生後ㄧ週內避免更換墊料及移動cage，出生ㄧ週後更換墊料時，會取部份舊巢料置於新cage中，並將仔鼠放置在巢料中以免驚擾母鼠。
飼料品牌:altromin 編號:13200;
墊料品牌: lignocel 德國硬木,白楊木
樂斯科：白楊木桃木片
IVC廠牌:biorone 112-120ACH
在小鼠約2週大時，可以剪尾或是剪趾來做Typing。
13. 如何breeding chimera以得到Germline ?
ㄧ公二母不分籠：將2隻母鼠放進已獨立分籠chimera 的籠子裡，小鼠出生後並不將母鼠或是公鼠取出，而小鼠直到離乳、再進行分籠的動作。
優點：籠位需求少；缺點：速度較慢
公鼠獨立分籠，母鼠每週替換：將chimera 獨立分籠，每次放入2隻性成熟的母鼠，七天以後放入新的2隻母鼠，舊的母鼠則分籠觀察是否懷孕。
優點：速度較快；缺點：籠位需求多
14. User 取得chimera後，如何進行後續Breeding?
129/sv Chimera
一.當使用者委託核心進行A4-3嵌合鼠產製 (Chimera production)服務完成後，核心移交至少2隻嵌合鼠公鼠。
二.小鼠性成熟約6~8周，待嵌合鼠性成熟以後，以一公二母的方式在傍晚時放入兩隻 C57BL/6J母鼠進行配種。
三.小鼠交配時間一般在凌晨時，如公鼠與母鼠進行配種，則可在當天早上發現母鼠陰道口有陰道栓塞，從發現陰道栓塞那天起紀錄為母鼠懷孕0.5天，而母鼠的懷孕週期約19~21天。
四.配種方式
1.每日觀察母鼠是否懷孕
每天早上觀察母鼠是否有陰道栓塞。如果有觀察到，則將母鼠標號紀錄並分籠，然後再放入新的母鼠替補，隔天再繼續觀察是否有陰道栓塞。如果沒有發現，則隔日早上再觀察。
2.每周替換母鼠
若動物房無法每天觀察時，可一周替換一次母鼠，並將替換下來的母鼠分籠觀察，如果母鼠懷孕，在懷孕約14天時，腹部會有明顯腫大的情形。
3. 採自然交配(母鼠不取出)
將公鼠和母鼠以一公二母的方式配種，而母鼠不與公鼠分籠，直到新生小鼠離乳再進行新生小鼠的分籠。
五.接近生產後期約14天以後，爲避免母鼠驚擾導致難產或是新生小鼠死亡，可給予巢片或視情況提前墊料更換。新生小鼠出生一周內務必停止更換墊料，並注意飲水和飼料供給，特別是生第一胎的新手母鼠容易因受到驚嚇而將新生小鼠咬死。
六.當新生小鼠二周大開眼時，可以取尾巴或是剪腳趾做PCR typing。由於核心所使用的細胞株為129/Sv，毛色基因型為A/A表現型agouti相對於C57BL/6J毛色基因型a/a表現型black為顯性，因此毛色agouti的新生小鼠才有可能是我們所要的，因此只需取毛色agouti 的新生小鼠樣本做PCR Typing即可。等到最後4周大時新生小鼠就可以離乳分籠繼續後續實驗。
Agouti-B6(JM8A3) Chimera
公鼠與母鼠的配法與129/sv chimera的ㄧ樣，但因為核心所顯微注射的Agouti-B6 ES cell line爲JM8A3。毛色基因為A/a，表現毛色為agouti。而C57BL/6J6老鼠的毛色基因為a/a，表現毛色為black。因此無法依據毛色來選擇那些新生小鼠需要typing與否。所以母鼠所生的每一隻小鼠都需要做PCR typing。待結果出來4周大以後就可離乳進行後續實驗。
15. Chimera生下來的子代是否都需要剪尾作 PCR Typing？
當User 拿到的chimera品種不同時，需有不同的作法
chimera為129品系：只需對毛色為Agouti 的子代進行剪尾、PCR Typing。
chimera為JM8A品系：不論毛色，所有的子代都需剪尾、PCR Typing
Backcross建議進行10代，如此ㄧ來和 backcross 的品系可以達到99.9% 的的相似度。
17. 核心設施提供的ES cell line與Blastocyst的Strain與毛色是?
核心設施目前提供的ES cell line有兩種品系，分別是R1 (129SVJ, 栗色) 與JM8A3 (B6, 栗色)，blastocyst則是B6品系 (黑色) 的小鼠提供，如果嵌合率越高，則出生的嵌合鼠的毛色會越偏向ES cell (栗色)，反之嵌合率低，則是黑色。
平均一隻小鼠會 inject 15~20 顆 blastocyst (with ES cell)，一次進行三隻。根據嵌合鼠產製服務使用規範，最終至少交付兩隻嵌合公鼠(毛色≧70％嵌合度)。當本核心未能交付任務，則將免費注射 60 顆囊胚，如仍無法完成任務，該項申請仍需結案且使用者必需付費。
1.請再次確認親代的 typing 是否正確。
2.請確認 PCR 的策略是否正確。
3.請做 southern blot 確認 PCR typing 的正確性。