服務與研究

    

 

一、服務

(1) 本核心提供的服務有:

A4-1    基因標的載體建構

 

A4-2    胚胎幹細胞基因標的

 

A4-3    嵌合鼠產製

 

A4-4    Cre-loxP 基因標的胚胎幹細胞(已與A4-2合併)

 

A4-5    小鼠胚胎冷凍保存和解凍復育服務

 

A4-6    小鼠精子冷凍保存服務

 

A4-7    標的後之胚胎幹細胞篩選

 

A4-8    小鼠淨化復育服務(已取消)

 

A4-9    小鼠胚胎纖維母細胞(E13.5)製備

 

A4-10   Cre 重組酶轉染胚胎幹細胞

 

A4-11   胚胎幹細胞DNA萃取

 

A4-12   南方墨點法篩選用探針測試

 

A4-13   基因轉殖鼠配種服務

 

A4-14   細菌人工染色體萃取

 

A4-15   標的載體萃取

 

A4-16   TALEN基因工程

 

A4-17   CRISPR/Cas9基因工程

 

A4-17-1 以CRISPR/Cas9基因工程產製loxP/FRT置入小鼠 (loxP/FRT KI by

        CRISPR/Cas9 Genome Engineering)

 

A4-18   Production of  gene modified mice by nuclease based 

        approach

 

A4-18-1 Production of small guide RNA

 

A4-18-2 Production of loxP/FRT Knock-in mice by stepwise nuclease-based approach

 

A4-18-3 Small guide RNA efficiency test

 (2) 建立更好服務品質:

在將完成基因剔除的胚胎幹細胞顯微注射入囊胚前,一般建議作染色體數目鑑定,確保剔除的胚胎幹細胞株具有40條染色體,無第八染色體重復及Y染色體缺失等最常造成失敗的原因,本核心已完成技術的建立與人員的訓練。對每件胚胎幹細胞標的服務(A4-2)一定管控其品質。

 

二、研究發展

 

 (1) 建立C57BL/6 小鼠品系胚胎幹細胞

本核心已成功培育出5 C57BL/6 品系胚胎幹細胞,已確定其中一株具備高遺傳能力(germ-line transmission)。使用者委員會也已作出利用此細胞株進行基因剔除實驗的相關規範,將可縮短得到純種基因剔除小鼠的時間。

 (2) 嵌合鼠產製技術研發。

本核心除了提供囊胚注射法產製嵌合鼠,也完成利用胚胎幹細胞與桑甚胚聚集技術法(ES cells -morula aggregation) 產製嵌合鼠的測試。將來可提供須要此技術的研究人員。

 (3) CRISPR/Cas9技術產製基因剔除/置入小鼠。

CRISPR/Cas9技術的發明,在基因轉殖鼠的研究領域是一項重要的突破。CRISPR/Cas9技術與胚胎幹細胞為基礎的基因剔除技術,最大的差異在於二者誘發同源重組的效率不同。以胚胎幹細胞為基礎的技術,必須被動仰賴細胞的基因組,在複製過程中自行產生斷點,並啟動同源重組的修復機制,才有機會將標的載體置換入細胞的同源基因內,發生的機率約1/106CRISPR/Cas9的技術則透過主動誘發,在細胞的同源基因區域以核酸酶產生斷點(double-strand break),促使細胞啟動同源互換修復機制的機率大增,故兩者的效率可相差至10,000倍,此一差異也實現在受精卵時期進行基因編輯的想法。

 

三、合作研究

本核心積極增加核心設施與國內外學者合作研究,共同開發具高附加價值的工具鼠或建立國人特有疾病小鼠模式。

 

 

四、訓練與推廣活動

本核心自成立以來每年舉辦約20場以上外賓參訪/說明會/專題演講/教育訓練課程等活動,推廣及訓練人數每年可達500 人次以上。本核心設施除了每年參與計畫辦公室所舉辦各項教育推廣活動,並依使用者需求隨至該單位舉辦座談會。此外,核心設施與台灣小鼠診所每月舉辦1 次的小鼠模式討論會(MMG, Mouse Meeting Group)CRISPR 聚會,每次參與人數皆達20 人以上。

 

本核心設施集結本校醫學院及基因體中心師資並配合政府南向政策及教育部國際司的『教育部菁英來台留學計劃』的國際交流政策,辦理「印尼科研高教部短期醫療培訓計畫課程」,全程以英語授課,本核心編撰講義且備份至教育部及科技部,本期招收8 位印尼教育部派選的助理教授級學員來台修習基因剔除技術

CRISPR 技術(2017/11/27~12/15),並進行技術傳承與交流,未來將持續每年授課 (附圖七),此活動大大提升本核心的國際知名度。

 

本核心亦配合科技部推動的未來科技展推出新穎技術「利用CRISPR 基因編輯技術及腺相關病毒載體開發擬人化疾病小鼠模式」參展及並獲獎,推廣核心設施至產業界(2017/12/28-30)

 

 

 

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