1.使用者提供欲萃取DNA之胚胎幹細胞及相關資料

2.核心依據使用者提供的資料〝胚胎幹細胞 DNA 萃取服務使用規範〞、與〝胚胎幹細胞DNA萃取流程〞(如下)，進行實驗。

3.核心將萃取結果交予使用者。

4.寄發服務完成通知。

實驗流程

↓24 well plate 中每個 well 加入 0.5ml Lysis buffer，37℃ 水平混合 1 小時

↓準備 new eppendorf tube，每個 tube 加入 10μl Proteinase K (10mg/ml)

↓於 plate 內以 blue tip 輕輕攪拌確定 lyse 完全後 transfer 至 eppendorf tube 內 (已加 PK)

↓50℃，3 小時（置於有混合裝置的培養箱反應）（overnight 佳）

↓加入 Phenol/CHCl₃（1：1）0.5 ml

↓室溫，混合( on shaker)，10 min

↓13200 rpm，4℃ 離心，10 min

↓準備 new eppendrof tube，每個 tube 加入 30 μl  7.5 M NH₄OAC

↓將上清液移至 new eppendrof tube(已加 7.5 M NH₄OAC)，mix 均勻(務必確實)

↓加入 100％ 酒精  1 ml，mix 均勻（有白色絲狀物出現）

↓4℃ 酒精沉澱，overnight (可省略)

↓13200 rpm，4℃，10 min

↓吸除上清液（小心！底部有白色沉澱）

↓加入 70％ 酒精 1 ml wash

↓13200rpm，4℃，3~5 min

↓吸除上清液（小心！底部有白色沉澱）air dry

↓加入 Low TE (依據盤子上的標示,回溶不同體積)

                * → 50μl

                2 → 34μl

                1 → 16μl

Lysis bffer

10 mM     Tris

0.02 M     EDTA

0.5％      SDS

20 mg/ml   RNAase

Low TE

10 mM    Tris