A4-13 基因轉殖鼠配種服務標準流程

1. 使用者提供欲進行基因轉殖鼠配種之相關資訊 (格式如〝基因轉殖鼠配種服務使用規範〞)。

2.使用者提供核心至少2隻基因鼠。

3. 核心依〝嵌合鼠配種服務實驗流程〞(如下) 進行小鼠配種實驗。

3.核心依使用者規範提交使用者至少2隻子代小鼠。

4.寄發服務完成通知。

實驗流程

129/sv Chimera

一.當使用者委託核心進行A4-3嵌合鼠產製 (Chimera production)或A4-18以核酸酶法產製基因修飾小鼠(Production of gene modified mice by nuclease based approach) 服務完成後，核心移交至少2隻chimera(A4-3)或1隻founder(A4-18)。

二.小鼠性成熟約6~8周，待嵌合鼠性成熟以後，以一公二母的方式在傍晚時放入兩隻 C57BL/6J母鼠進行配種。

三.小鼠交配時間一般在凌晨時，如公鼠與母鼠進行配種，則可在當天早上發現母鼠陰道口有陰道栓塞，從發現陰道栓塞那天起紀錄為母鼠懷孕0.5天，而母鼠的懷孕週期約19~21天。

四.配種方式

    1.每日觀察母鼠是否懷孕

    每天早上觀察母鼠是否有陰道栓塞。如果有觀察到，則將母鼠標號紀錄並分籠，然後再放入新的母鼠替補，隔天再繼續觀察是否有陰道栓塞。如果沒有發現，則隔日早上再觀察。

    2.每周替換母鼠

    若動物房無法每天觀察時，可一周替換一次母鼠，並將替換下來的母鼠分籠觀察，如果母鼠懷孕，在懷孕約14天時，腹部會有明顯腫大的情形。

    3. 採自然交配(母鼠不取出)

    將公鼠和母鼠以一公二母的方式配種，而母鼠不與公鼠分籠，直到新生小鼠離乳再進行新生小鼠的分籠。

五.接近生產後期約14天以後，爲避免母鼠驚擾導致難產或是新生小鼠死亡，可給予巢片或視情況提前墊料更換。新生小鼠出生一周內務必停止更換墊料，並注意飲水和飼料供給，特別是生第一胎的新手母鼠容易因受到驚嚇而將新生小鼠咬死。

六.當新生小鼠二周大開眼時，可以取尾巴或是剪腳趾做PCR typing。由於核心所使用的細胞株為129/Sv，毛色基因型為A/A表現型agouti相對於C57BL/6J毛色基因型a/a表現型black為顯性，因此毛色agouti的新生小鼠才有可能是我們所要的，因此只需取毛色agouti 的新生小鼠樣本做PCR Typing即可。等到最後4周大時新生小鼠就可以離乳分籠繼續後續實驗。

Agouti-B6(JM8A3) Chimera

公鼠與母鼠的配法與129/sv chimera的ㄧ樣，但因為核心所顯微注射的Agouti-B6 ES cell line爲JM8A3。毛色基因為A/a，表現毛色為agouti。而C57BL/6J6老鼠的毛色基因為a/a，表現毛色為black。因此無法依據毛色來選擇那些新生小鼠需要typing與否。所以母鼠所生的每一隻小鼠都需要做PCR typing。待結果出來4周大以後就可離乳進行後續實驗。