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作業流程

基因標的載體建構
 

A4-9 小鼠胚胎纖維母細胞製備

使用者提供欲進行小鼠胚胎纖維母細胞製備之供胚小鼠相關資訊 (格式如〝小鼠胚胎纖維母細胞製備服務使用規範〞)

核心確認小鼠胚胎纖維母細胞製備服務書面資訊。

使用者提供供胚小鼠

核心依〝小鼠胚胎纖維母細胞製備服務實驗流程〞(如下),進行小鼠胚胎纖維母細胞製備服務。

移交小鼠胚胎纖維母細胞

寄發服務完成通知。

 

 

小鼠胚胎纖維母細胞製備實驗流程

第一天    :將使用者提供的母小鼠腹腔注射PMSG (5 I.U.)催卵。

第三天    :46~48小時後腹腔注射HCG (5 I.U.),並將母鼠置於公鼠籠內交配。

第四天    :檢查母鼠陰道口是否有陰道栓,並將具陰道栓的小鼠收集備用。

第十八天1. 犧牲供胚母鼠,取出胚胎並以鑷子將絨毛膜及胎盤清除。

2. 以含抗生素的PBS清洗胚胎,並以鑷子將四肢、頭部及紅色組織去除。

3. 再次以含抗生素的PBS清洗,以剪刀將組織剪碎,然後將剪碎的組織移入含攪拌子的三角瓶中,加入20-~30mL Trypsin,於室溫中攪拌30分鐘。

4. 將上清液吸出,並加入相同體積的培養液中止反應,置於冰上備用。三角瓶中再加入15-20mL Trypsin繼續攪拌15~25分鐘。

5. 收集上清液,並加入相同體積的培養液中止反應,連同步驟4之細胞以1000rpm室溫離心10分鐘。

6. 去除上清液,並以培養機基將細胞打散,將細胞種至B10細胞培養皿(以收集到胚胎數決定培養皿數量) ,並置於培養箱中培養 。

7. 待細胞長至8~9分滿後將細胞冷凍保存並交予使用者。

 
胚胎幹細胞基因標的
嵌合鼠產製
Cre-loxP基因標的胚胎幹細胞
標的後之胚胎幹細胞篩選與確認
小鼠胚胎纖維母細胞製備
Cre重組酶轉染胚胎幹細胞
胚胎幹細胞DNA萃取服務
南方墨點法篩選用探針測試服務
嵌合鼠配種服務
細菌人工染色體萃取服務
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

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