小鼠胚胎纖維母細胞製備實驗流程
第一天 :將使用者提供的母小鼠腹腔注射PMSG
(5 I.U.)催卵。
第三天 :經46~48小時後腹腔注射HCG
(5 I.U.),並將母鼠置於公鼠籠內交配。
第四天
:檢查母鼠陰道口是否有陰道栓,並將具陰道栓的小鼠收集備用。
第十八天:1.
犧牲供胚母鼠,取出胚胎並以鑷子將絨毛膜及胎盤清除。
2.
以含抗生素的PBS清洗胚胎,並以鑷子將四肢、頭部及紅色組織去除。
3.
再次以含抗生素的PBS清洗,以剪刀將組織剪碎,然後將剪碎的組織移入含攪拌子的三角瓶中,加入20-~30mL
Trypsin,於室溫中攪拌30分鐘。
4.
將上清液吸出,並加入相同體積的培養液中止反應,置於冰上備用。三角瓶中再加入15-20mL
Trypsin繼續攪拌15~25分鐘。
5.
收集上清液,並加入相同體積的培養液中止反應,連同步驟4之細胞以1000rpm室溫離心10分鐘。
6.
去除上清液,並以培養機基將細胞打散,將細胞種至B10細胞培養皿(以收集到胚胎數決定培養皿數量)
,並置於培養箱中培養 。
7.
待細胞長至8~9分滿後將細胞冷凍保存並交予使用者。
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