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作業流程

基因標的載體建構
 

A4-3 嵌合鼠產製服務流程

使用者提供核心小鼠胚胎幹細胞每株至少106(冷凍於液態氮)或 105/cm237 培養中)。

核心依〝囊胚顯微注射實驗流程〞(如下) 進行小鼠囊胚顯微注射。

顯微注射完成後核心人員依據當日實驗紀錄填寫囊胚顯微注射紀錄表” (如下表)

核心依使用者規範提交使用者嵌合鼠。

寄發服務完成通知。

 

 

 

囊胚顯微注射實驗流程

第一天: 3~4週大的C57BL/6J母小鼠腹腔注射PMSG (5 I.U.)催卵。
第三天: 46~48小時後腹腔注射HCG (5 I.U.),並將母鼠置於公鼠籠內交配。
第四天:

1. 檢查母鼠陰道口是否有陰道栓,並將具陰道栓的小鼠收集備用。

2. ICR母鼠置於結紮公鼠籠內交配。

第五天:

檢查ICR母鼠陰道口是否有陰道栓,然後將具陰道栓的小鼠視為代孕母鼠,取出備用。

第七天:

1. 取囊胚 (day 3.5)

方式:犧牲具陰道栓之C57BL/6J母鼠,取出子宮後以0.5 ml囊胚培養基用1 ml針筒注射入子宮腔內沖洗出囊胚,並移至培養箱中培養。

2. 囊胚顯微注射:利用顯微操控儀,使每顆囊胚約注入15顆胚胎幹細胞(外觀看起來圓與完整)。

3. 殖入:將注射完成的囊胚約取15~20顆,植入代孕母鼠(day 3)子宮內,然後將完成植入手術之母鼠放置動物房待產。

第二十四天: 小鼠出生。
   

 

囊胚顯微注射紀錄表

 

 

Blastocyst Injection Data

Date (mm / dd / yyyy) :          /        /                        Recorder :

ES Cell :

◎   受精卵來源   □ Albino C57BL/6J   □ C57BL/6J  Birthday :       /     /

 

Number

Date

Time

備註

PMSG

 

/      /

 

 

HCG

 

/      /

 

 

  Foster          □ ICR             □ C57. CBA    Birthday:     /     /

 

Number

Date

Time

Plug

Mating

 

/      /

 

 

◎  參、取卵時間           /       (   )         :      ~        :       

       使用母鼠數量 :

判定時間

Blastocyst

morula

異常卵

死亡卵

備註

:

 

 

 

 

 

◎  Injection            /       (   )          :     ~        :       

       確認卵時刻 :       :

取卵時Blastocyst

morula

異常卵

死亡卵

備註

 

 

 

 

 

Injection總數 :             ( 成功 :             :            )

無法injection數目

 

植入子宮            /       (   )          :     ~        :       

       預定出生日期 :        /                             by :

NO.

植入個數 ( R/L )

懷孕確認

子代數目

備註

 

/

 

M (       ) / F (       )

 

 

/

 

M (       ) / F (       )

 

 

/

 

M (       ) / F (       )

 

 

/

 

M (       ) / F (       )

 

 

     

M (       ) / F (       )

 

 

胚胎幹細胞基因標的
嵌合鼠產製
Cre-loxP基因標的胚胎幹細胞
標的後之胚胎幹細胞篩選與確認
小鼠胚胎纖維母細胞製備
Cre重組酶轉染胚胎幹細胞
胚胎幹細胞DNA萃取服務
南方墨點法篩選用探針測試服務
嵌合鼠配種服務
細菌人工染色體萃取服務
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

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