最新消息

 

作業流程

基因標的載體建構

 

A4-14 細菌人工染色體萃取服務標準流程

1.      使用者向 Geneservice 購買 BAC clone,並作凍菌保存。

 

2.      使用者需提供基因標的載體所需的菌株,本核心接受以塗盤式培養皿的方式移交2株菌株

3.      使用者提供欲進行細菌人工染色體萃取相關資訊 (格式如〝細菌人工染色體萃取服務使用規範〞)

4.      核心依據細菌人工染色體萃取實驗流程〞(如下),進行實驗。

5.      核心依使用者規範提交使用者每一菌株40μgDNA

6.      寄發服務完成通知。

 

實驗流程

從使用者提供的培養皿中挑選single colony5ml LB(25μg/ml chloramphenicol)

  37180rpm14~16小時

↓Transfer50ml LB(25μg/ml chloramphenicol)37180rpm9~10小時

↓Transfer1L LB(25μg/ml chloramphenicol)37180rpm14~16小時

使用MN Plasmid DNA Purification NucleoBond PC500 kit進行萃取服務

1.      離心5000rpm415分鐘

2.      去上清液,加入40ml S1 Buffer,混合均勻

3.      40ml S2 Buffer,混合均勻,不可vortex

4.      40ml S3 Buffer,混合均勻,不可vortex

5.      置冰上5分鐘

6.      lysate倒入Folded filterfilter下接AX500 column

7.      18ml N3 Buffer wash,並將N5 Buffer加熱至55

8.      15ml N5 Buffer elution(AX500 column下接corex Tube)

9.      11ml isopropanol,混合均勻

10.  12000rpm離心,430分鐘,

11.  去上清液後加5ml 70%酒精

12.  12000rpm離心,410分鐘

13.  去上清液後air dry

14.  回溶ddH2O4保存

 

胚胎幹細胞基因標的
嵌合鼠產製
Cre-loxP基因標的胚胎幹細胞
標的後之胚胎幹細胞篩選與確認
小鼠胚胎纖維母細胞製備
Cre重組酶轉染胚胎幹細胞
胚胎幹細胞DNA萃取服務
南方墨點法篩選用探針測試服務
嵌合鼠配種服務
細菌人工染色體萃取服務
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

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