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小鼠胚胎冷凍保存和解凍實驗流程
第一天:
將使用者提供的供卵母小鼠打PMSG(5IU)催卵。
第三天:
經46~48小時後打HCG(5IU)，並將母鼠置於公鼠籠內交配。
第四天:
檢查母鼠陰道口是否有陰道栓，將具陰道栓的小鼠取出備用。
第六天:
1.取卵
( day 2.5 )
取卵方式：犧牲具陰道栓
2.5天之母鼠，取出輸卵管後以0.2c.c.
M2培養基沖出卵，並移至培養箱中培養。
2.
胚胎冷凍步驟:
(1)
於室溫下將胚胎以口吸管吸至1
M DMSO液滴中洗去培養液。
(2)
將胚胎均分至1
M DMSO液滴中(約20-40顆一滴)。
(3)
以P20吸取1M
DMSO 5 ml連同胚胎移入冷凍管內。
(4)
將冷凍管置於冰上5分鐘。
(5)
沿管壁加入DAP213
95 ml(0℃)，冰上5分鐘。
(6)
將冷凍管置入液態氮保存。
3.
胚胎解凍步驟:
(1)
將0.25
M sucrose溶液置於37℃水浴槽加溫。
(2)
由液態氮筒中取出冷凍管，室溫靜置1分鐘。
(3)
取加溫過之0.25
M sucrose溶液900
ml延管壁加入。
(4)
待冷凍管內溶液溶解後以P1000將溶液連同胚胎移入培養皿中。
(5)
以吸管吸取胚胎至PBI液滴中洗去抗凍劑。
(6)
將胚胎置於M16培養皿中培養。
(7)
將胚胎植入假懷孕（day
2.5）的ICR代養母鼠，約取15~20顆胚胎平均殖入代養母鼠的子宮中。
(8)
17天後小鼠出生。
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